ELISA ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಹಂತಗಳು ಮತ್ತು ವಿಷಯಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ

ಮೊದಲ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ತೀವ್ರವಾದ ಹಿಮೋಲಿಸಿಸ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಕಾಳಜಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬೇಕು. ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಹೀಮ್ ಗುಂಪನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪೆರಾಕ್ಸೈಡ್ಗಳಂತೆಯೇ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, HRP ಯೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಕಿಣ್ವವಾಗಿ ELISA ನಿರ್ಣಯದಲ್ಲಿ, ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಅಧಿಕವಾಗಿದ್ದರೆ, ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಘನ ಹಂತಕ್ಕೆ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಸುಲಭ, ಆದ್ದರಿಂದ ಬಣ್ಣ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗಾಗಿ ನಂತರ ಸೇರಿಸಲಾದ HRP ತಲಾಧಾರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ. ಅಸೆಪ್ಟಿಕ್ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯಿಂದ ಬೇರ್ಪಟ್ಟ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಒಂದು ವಾರದವರೆಗೆ 2 ~ 8 ಡಿಗ್ರಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದ್ದರೆ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ -70 ಡಿಗ್ರಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇಡಬೇಕು. ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಸೀರಮ್ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದೂರದ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಮಾಲಿನ್ಯ ತಪ್ಪಿಸಲು ಗಮನ ಪಾವತಿ ಮಾಡಬೇಕು, ಒಂದು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಬೆಳವಣಿಗೆ, ಕೆಲವು ಕಿಣ್ವಗಳು ಅದರ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಜನಕಗಳು, ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಪ್ರೊಟೀನ್ಗಳ ವಿಭಜನೆಯ ಪರಿಣಾಮ ಇರಬಹುದು; ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿಯ -ಗ್ಯಾಲಕ್ಟೋಸಿಡೇಸ್‌ನಂತಹ ಕೆಲವು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳು ಸ್ವತಃ ಅನುಗುಣವಾದ ಕಿಣ್ವದೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ. ಮಾದರಿ ಸಂರಕ್ಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದ ಉಂಟಾದ ಪ್ರಕ್ಷುಬ್ಧತೆಗಳು ಅಥವಾ ಫ್ಲೋಕ್ಯುಲೆಂಟ್‌ಗಳ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಳೆಯ ನಂತರ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬೇಕು. ವಿದ್ಯುತ್ ವೈಫಲ್ಯದಿಂದಾಗಿ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಗಳ ಘನೀಕರಣ{13}}ವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು. ಮಾದರಿಯ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಘನೀಕರಣದಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಕತ್ತರಿ ಬಲವು{15}}ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಅಣುಗಳನ್ನು ನಾಶಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ತಪ್ಪು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಮಾದರಿಗಳ ಮಿಶ್ರಣಕ್ಕೆ ಸಹ ಗಮನ ನೀಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಹಿಂಸಾತ್ಮಕ ಆಂದೋಲನಗಳನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಬಾರದು. ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪದೇ ಪದೇ ಹಿಮ್ಮುಖಗೊಳಿಸಬೇಕು.

ELISA ನಲ್ಲಿ, ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮೂರು ಹಂತಗಳಿವೆ, ಅಂದರೆ, ಕಿಣ್ವ ಸಂಯೋಜಕವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಸೀರಮ್ ಕರಗಿದ ನಂತರ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸ್ಥಳೀಯವಾಗಿ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಸಮಾನವಾಗಿ ವಿತರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ. ಇದನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಬೆರೆಸಬೇಕು, ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮತ್ತು ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು. ಇದನ್ನು ತಲೆಕೆಳಗಾಗಿ ಬೆರೆಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಮಿಕ್ಸರ್ ಮೇಲೆ ಬಲವಾಗಿ ಆಂದೋಲನ ಮಾಡಬೇಡಿ. ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಹೆಪ್ಪುರೋಧಕಗಳ ಸಹಾಯದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಸೀರಮ್ನ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟುವಿಕೆ ಮತ್ತು ರಕ್ತ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟುವಿಕೆಯ ಸಂಕೋಚನದ ನಂತರ ಮಾತ್ರ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು. ಡಿಲ್ಯೂಯೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಪ್ಲೇಟ್ ರಂಧ್ರಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಬಹುದು, ಮತ್ತು ನಂತರ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಮೈಕ್ರೋ ಆಸಿಲೇಟರ್ನಲ್ಲಿ 1 ನಿಮಿಷ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 5 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾದ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು 4 ಡಿಗ್ರಿ C ನಲ್ಲಿ ಶೇಖರಿಸಿಡಬಹುದು ಮತ್ತು ಒಂದು ವಾರಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅಳತೆ ಮಾಡಿದವುಗಳನ್ನು ಶೀತಲ ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ELISA ನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಕೆಲವು ಪ್ರತಿಕಾಯ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿಜನಕ ಘಟಕಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ದೇಹದ ದ್ರವಗಳು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಸೀರಮ್), ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆ (ಲಾಲಾರಸ) ಮತ್ತು ಮಲ (ಮೂತ್ರ, ಮಲ) ಎಲ್ಲವನ್ನೂ ಮಾದರಿಗಳಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು. ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದ ELISA ಕಿಟ್‌ನ ಭಾಗವನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಇಡಬೇಕು.